Medio nutritivo agar alcalino para el aislamiento de Vibrio cholerae. Clasificación de medios nutritivos Métodos para preparar agar en placa.

Descripción 10733-00005

Medio nutritivo Agar alcalino descripción

Agar alcalino medio nutritivo- un medio nutritivo denso para el aislamiento de Vibrio cholerae.
La composición de alta calidad, bastante nutritiva y promueve la rápida formación de colonias de Vibrio, mientras que el pirosulfito de sodio suprime parcialmente la microflora que la acompaña.
El factor selectivo es un nivel elevado de pH, que en última instancia suprime el desarrollo de microorganismos extraños y no afecta el crecimiento del patógeno del cólera.

Medio nutritivo Agar alcalino Características técnicas

El factor selectivo es un nivel elevado de pH, que en última instancia suprime el desarrollo de microorganismos extraños y no afecta el crecimiento del patógeno del cólera.
El cultivo se realiza a 37°C durante 12-14 horas.

Composición del agar alcalino :
Hidrolizado pancreático de harina de pescado, peptona enzimática seca, extracto de levadura, glucosa, fosfato disódico, cloruro de sodio, metabisulfito de sodio, carbonato de sodio, agar.

Preparación de Agar Alcalino:
El medicamento en la cantidad necesaria para preparar una serie específica de medio nutritivo se mezcla en 1 litro de agua destilada, se hierve hasta que el agar se derrita por completo, se filtra a través de un filtro de gasa de algodón, se vierte en botellas y se esteriliza en autoclave durante 20 minutos. a temperatura
(121±1)°C.
El medio nutritivo preparado es transparente y de color amarillo. Se permite una ligera opalescencia.
pH 8,0±0,2
El medio preparado se puede almacenar durante 10 a 14 días a una temperatura de 2 a 8 °C en un lugar protegido de la luz.

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• Instrucciones de instalación
• Instrucciones de instalación y mantenimiento.
• Instrucciones de instalación y funcionamiento.
• Instrucción de ajuste
• Instrucciones de mantenimiento y reparación.
• Manual de entrenamiento
• Manual de usuario y servicio
• Instrucciones de reparación (diagrama eléctrico)
• Instrucciones de mantenimiento
• Manual de instalación
• Manual de servicio e instalación.
• Instrucciones de operación y mantenimiento.
• Operación manual
• Método de verificación
• Esquema electrico
• Manual de usuario
• Instrucciones de reparación
• Catálogo (elementos, repuestos, etc.)
• Método de prueba
• Método de configuración
• Método de cálculo
• Materiales metodológicos
• Pasaporte
• Software
• Recomendaciones de reparación
• Guía del administrador
• Guía del operador
• Manejo manual
• Manual de instalación
• Manual de instalación y mantenimiento
• Guía de usuario
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• Documentación técnica/Manual
• Especificaciones
• Especificaciones
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Es Es un polvo amarillo fino, higroscópico y fotosensible.

El conjunto de reactivos debe asegurar el crecimiento de los sellos de prueba Vibrio cholerae cholerae 01 grupo P-1 (145), Vibrio cholerae eltor 01 grupo M-878 (890), Vibrio cholerae non 01 P-9741 al inocular 0,1 ml de suspensión microbiana de cada cepa de prueba después de 12 a 14 horas de incubación a una temperatura de 37oC en forma de colonias suaves y translúcidas con un tinte azulado a la luz transmitida. con un diámetro de al menos 1,0 mm.

Diseñado para aislar el microbio de la tos ferina de material infectado y cepas de cultivo.

Compuesto: hidrolizado de caseína pancreática, cloruro de sodio, carbonato de sodio, fosfato disódico anhidro, extracto de levadura alimentaria, agar microbiológico.

Preparación: El medio nutritivo en la cantidad indicada en la etiqueta se mezcla bien en 1 litro de agua destilada, se hierve durante 2-3 minutos, revolviendo ocasionalmente, hasta que el agar se derrita por completo. Filtrar a través de un filtro de gasa de algodón, verter en viales y esterilizar en autoclave durante 20 minutos a una temperatura de 120oC.

Vitaminas en dosis prescritas con precisión. Utilizan aminoácidos como fuentes de nitrógeno. La ventaja de estos medios es que tienen una composición constante; pueden usarse para determinar las necesidades de los microbios de ciertos nutrientes;

Los medios nutritivos sólidos se preparan a partir de medios líquidos con la adición de un sellador. El agar-agar se suele utilizar como sellador. El agar-agar es un producto obtenido a partir de algas marinas, es un polvo o placas amarillentas, contiene polisacáridos de alto peso molecular, la mayoría de los microorganismos no lo descomponen, no se destruye con el autoclave, no cambia el valor nutricional del medio y no inhibe el crecimiento de microbios. Para los campos inmunológicos y bacteriológicos, se utiliza agar clarificado congelado que, cuando se hierve o se esteriliza en autoclave una mezcla de polvo y agua, se funde a una temperatura de 85-100°C y cuando se enfría a 45-48°C forma un gel.

Para preparar medios nutritivos densos, se añade agar-agar en una concentración del 1,5 al 3%.

Ambientes simples.

Caldo de carne y peptona (MPB) Es la base proteica de todos los medios.

Hay varias formas de preparar MPB:

a) en agua con carne con la adición de peptona ya preparada: este es el llamado caldo de carne y peptona;

b) sobre la digestión de los productos de hidrólisis de materias primas utilizando enzimas (tripsina - caldo Hottinger, pepsina - caldo Martin).

Son cómodos para el transporte, pueden almacenarse durante mucho tiempo, liberan a los laboratorios del enorme proceso de preparación de los medios y los acercan a la solución del problema de la estandarización de los medios. La industria médica produce medios secos Endo, Levin, Ploskirev, agar sulfito de bismuto, agar nutritivo, carbohidratos con indicador de PA y otros.

Termostatos

Los termostatos se utilizan para cultivar microorganismos.

Un termostato es un dispositivo que mantiene una temperatura constante. El dispositivo consta de un calentador, una cámara y paredes dobles entre las cuales circula aire o agua. La temperatura está regulada por un termostato. La temperatura óptima para la reproducción de la mayoría de los microorganismos es de 37°C.

Método para preparar agar en placa.

El MPA se funde en un baño de agua y luego se enfría a 50-55°C. Se quema el cuello de la botella con la llama de una lámpara de alcohol, se abren las placas de Petri de modo que el cuello de la botella encaje sin tocar los bordes de la placa, se vierten 10-15 ml de MPA y se quita la tapa. Cerrado, se agita el plato para que el medio se distribuya uniformemente y se deja sobre una superficie horizontal hasta que endurezca. Después del secado, las placas de agar se almacenan en frío.

Siembra en bucle

Usando un asa enfriada esterilizada, tome una gota de material, abra un borde de la copa con la mano izquierda, lleve el asa hacia adentro y haga algunos trazos en un lugar con un asa en el borde opuesto, luego corte el asa e inocule. el material con movimientos paralelos desde un borde de la copa al otro con un intervalo de 5-6 mm. Al comienzo de la siembra, cuando hay muchos microbios en el circuito, darán un crecimiento confluente, pero con cada pasada habrá cada vez menos microbios en el circuito, permanecerán solitarios y producirán colonias aisladas.

Siembra según el método Drigalsky.

Este método se utiliza para inocular material muy contaminado con microflora (pus, heces, esputo). Para sembrar mediante el método Drigalsky, coge una espátula y varias tazas (3-4). Espátula- Este es un instrumento hecho de alambre de metal o dardo de vidrio, doblado en forma de triángulo o de L. El material se introduce en la primera copa con un asa o pipeta y se distribuye uniformemente con una espátula sobre la superficie del medio, con la misma espátula, sin quemarla, se frota el material en el medio nutritivo en la segunda copa; en el tercero. Con dicha siembra, la primera copa tendrá un crecimiento confluente y en las copas siguientes crecerán colonias aisladas.

Aislamiento de cultivo puro según Shchukevich

Para sembrar, tome un medio nutritivo recién preparado con condensado. El material de prueba se toma con un asa y se introduce con cuidado, observando las reglas de asepsia, sin tocar el medio ni las paredes, en el agua de condensación. Las bacterias con alta movilidad “se arrastran” sobre la superficie húmeda del agar inclinado.

Como resultado del trabajo autónomo, el alumno deberá saber:

1. Clasificación, morfología de las setas, sus métodos de estudio.

2. Clasificación y morfología de actinomicetos.

3. Reglas de regímenes antiepidémicos y precauciones de seguridad.

Ser capaz de:

1. Diferenciar microorganismos mediante microscopía.

2. Microscopio de las preparaciones teñidas.

3. Desinfecta el material, trata tus manos con desinfectantes.

4. Preparar preparaciones a partir de cultivos puros.

Agar sangre para la prueba CAMP. A agar nutritivo al 2%, pH 7,4-7,6, agregue 0,2% de glucosa y glóbulos rojos de oveja o ganado vacuno. Los glóbulos rojos de sangre citratada se lavan tres veces con una solución isotónica de cloruro de sodio para eliminar la antihemolisina que pueda contener el suero y luego se resuspenden en la misma solución hasta el volumen de sangre original. Se añade al agar una suspensión de glóbulos rojos al 5%.

Agar bilis-alcalino (en adelante BAL). Agar nutritivo seco - 35,0 g; autolisado de levadura - 20,0 ml; glucosa - 10,0 g; agua destilada - 600 ml. El agar se funde, se filtra, se añade bilis bovina fresca (400,0 ml) y carbonato de sodio (5,0 g).

Esterilizar el medio preparado en autoclave a 112 0 C durante 15 minutos. Antes de verter en tazas, se añaden al medio 50,0 ml de sangre fresca (de oveja, conejo o humana), 12,5 ml de una solución de cristal violeta al 0,01% y 20 ml de solución de hidróxido de potasio (en lo sucesivo, KOH).

Leche con azul de metileno. La leche fresca se lleva a ebullición, se deja por un día, se retira de la crema, se hierve por segunda vez, se deja nuevamente por un día y se retira la capa superior por segunda vez. La leche desnatada se filtra a través de una gruesa capa de algodón y se alcaliniza con una solución de carbonato de sodio al 10% hasta un pH de 7,2. A 100 ml de leche se añaden 2,0 ml de una solución acuosa al 1% de azul de metileno. El medio así preparado se vierte en 5,0 ml en tubos de ensayo esterilizados y se esteriliza con vapor de agua durante 3 días durante 30 minutos.

Medio de diagnóstico diferencial de enterococos (EDDS). Agar nutritivo seco - 35 g, autolisado de levadura para preparar medios nutritivos - 20 ml, glucosa - 10 g, agua destilada - 800 ml. Derretir al calentar, filtrar, esterilizar a 112 0 C en autoclave durante 15 minutos, pH 7,2-7,4.

Antes de verter en tazas, se agrega TTX - 0,1 g al medio nutritivo; solución acuosa de cristal violeta 0,01% - 12,5 ml; ácido nalidíxico - 0,1 g; leche desnatada esterilizada, calentada a 44-45 0 C - 200 ml; Sangre fresca desfibrinada (animal o humana) - 50 ml. El contenido se agita bien y se vierte en tazas de 7 ml.

Agar nutritivo de levadura de azúcar con telurito potásico. Agar nutritivo seco - 35 g, autolisado de levadura - 20 ml, glucosa - 10 g, agua destilada - 1000 ml. La mezcla preparada se funde cuando se calienta, se añade citrato de sodio - 5,0 g. El medio se esteriliza a 112 0. C durante 15 minutos, pH 7,2-7,4. Antes de verter el medio en vasos esterilizados, añadir 50 ml de suero de caballo, 0,1 g de ácido nalidíxico y 0,7 g (35 ml de una solución acuosa al 2%) de telurito potásico y mezclar bien.

Caldo nutritivo con glucosa. A 100 ml de caldo nutritivo, pH 7,2-7,4, añadir 0,2 g de glucosa.

El medio preparado se esteriliza en fracciones durante 3 días seguidos durante 20 minutos o una vez durante 15 minutos a 0,5 atm. en autoclave.

Agar sangre al 5%. A 100 ml de agar nutritivo al 2%, derretido y enfriado a 45 grados. C, pH 7,4-7,6, respetando las normas de asepsia, añadir 5 ml de sangre desfibrinada de cordero, caballo o conejo. La mezcla se mezcla bien y se vierte en tazas en una capa de 3-4 mm.

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